滤纸分离氨基酸是谁发明的（氨基酸的滤纸层析实验报告）

baike.aiufida.com 小编在本篇文章中要讲解的知识是有关滤纸分离氨基酸是谁发明的和氨基酸的滤纸层析实验报告的内容，详细请大家根据目录进行查阅。

文章目录：

• 1、什么事塔板理论,解释纸层析氨基酸的原理
• 2、求化学实验中纸层析法鉴定氨基酸中的？
• 3、如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定
• 4、纸层析实验的实验步骤及现象
• 5、氨基酸的定性鉴定原理

什么事塔板理论,解释纸层析氨基酸的原理

塔板理论就是将色谱层析柱比作蒸馏塔,待分离组分在分馏塔的塔板间移动,在每一个塔板内组分分子在固定相和流动相之间形成平衡,随着流动相的流动,组分分子不断从一个塔板移动到下一个塔板,并不断形成新的平衡.

而柱效通常用每米层析柱的理论塔板数（N）或每个塔板的柱床长度H（理论塔板高度,HETP）表示.

纸层析又称纸色谱法,以纸为载体的色谱法.滤纸纤维的结合水为固定相,而以有机溶剂作为流动相.由于样品中各物质分配系数不同,因而扩散速度不同,从而达到分离的目的.

求化学实验中纸层析法鉴定氨基酸中的？

纸层析法(paPer ChromaograPhy)通常用于蛋白质的氨基酸成分定性和定量，1944年A.亅.p.马丁第一次用纸层析法分析氨基酸，得到很好的分离效果。到现在为止，纸层析法已经成为是性或定量测定多肽，核酸碱基，糖，有机酸，维生素，抗生素等物质的一种最简单易行的分离分析工具。

层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。对于复杂的混合物，可做双向层析。一具原理是以滤纸为惰性支持物的分配层析，层析溶剂由有机溶剂和水组成。滤低纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水依为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，由于分配系数不同，结果物质在两相间不断分配而得到分离

其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中，点样在滤纸的一端，再选用适当的溶剂系统，从点样的一端通过毛细现象向另一端展开卜，展开完毕，取岀滤纸晾干或烘干，再以适当的显色剂或紫外线灯，荧光灯下观察其图谱

。样品经展开后某一物质在纸层析谱上的位置常用比移值(rate of folW，R.)米表示，R.=原点至层析斑点中心跑巨离/原点至溶剂前沿的距离=X/Y

在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与被测物的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度等因素有关，本实验利用单向纸层析法分离氨基酸。…

如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定

1、在滤纸条上端边缘约1厘米的中央剪一小孔。

2、将滤纸条平放于洁净的纸上，在距离滤纸下端25px处用铅笔轻画一横线，并在横线的中央画一直径为2mm的小圆圈。

3、用毛细管吸取氨基酸混合液，在滤纸条下端的小圆圈内点样。

4、取干燥大试管，加入被水饱和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到试管壁上，将试管垂直固定在距滤纸条下端12.5px处穿大头针。从滤纸条上端小孔处穿棉线并左右分开，调节线的高度使滤纸垂直悬于试管内且下湍浸入溶液12.5px，注意勿使点样点浸入溶液中，亦勿使滤纸条接触试管壁。

5、此时即可看到溶剂向上移动，溶剂升到一定高度时，小心将纸条取出，以铅笔标出溶剂上升的前沿。

6、将滤纸条两端，用大头针钉在小木框上，吹干后用喷雾器均匀地喷一层0.2%茚三酮乙醇溶液，然后再将滤纸条吹干，即可看到纸上显出三色点，每个色点代表一种氨基酸。

在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动。

扩展资料：

在滤纸纤维上吸附着一层水保持成为固定相，另一部分是能溶于水的有机溶剂，如苯酚或正丁醇作为流动相，它沿着滤纸长的方向向上或向下流动。

氨基酸的亲脂性愈强，则与有机溶剂一起移动的倾向愈大; 氨基酸的亲水性愈强，则被保留在固定相中的趋势愈大。

以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。

当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。

用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。

参考资料来源：百度百科-氨基酸纸层析法

百度百科-纸层析法

纸层析实验的实验步骤及现象

氨基酸的纸层析 一、 实验目的 1.了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法.2.学习纸层析法的操作技术,分析未知样品氨基酸的成分.二、 实验原理 用滤纸为支持物进行层析的方法,称为纸层析法,它是分配层析法的一种.纸层析所用的展层溶剂大多是由水饱和的有机溶剂组成.滤纸纤维的—OH 基的亲水性基团,可吸附有机溶剂中的水作为固定相,有机溶剂作为流动相,它沿滤纸自下向上移动,称为上行层析；反之,使有机溶剂自上而下移动,称为下行层析.将样品点在滤纸上进行展层,样品中的各种氨基酸即在二相中不断进行分配,由于它们各自的分配系数不同,故在流动相中移动速率不等,从而使不同的氨基酸得到分离和提纯.纸层析法主要是依据混合组分对二相分配系数的差异进行分离,但亦存在着某种程度的吸附作用和离子交换现象.氨基酸经层析在滤纸上形成距原点不等的层析点,氨基酸在滤纸上的移动速率用Rf 表示.Rf = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 只要实验条件(如温度、展层溶剂的组分、pH、滤纸的质量等)不变,Rf 值是常数,因此可做定性分析参考.如果溶质中氨基酸组分较多或其中某些组分的Rf 值相同或近似,用单向层析不宜将它们分开,为此可进行双向层析,在第一溶剂展开后将滤纸转动90度,以第一次展层所得的层析点为原点,再用另一种溶剂展层,即可达到分离目的.由于氨基酸无色,可利用茚三酮反应使氨基酸层析点显色,从而定性和定量.三、仪器和试剂 仪器 层析滤纸、烧杯、剪刀、层析缸、培养皿、猴头喷雾器、微量加样器或毛细管、吹风机一个、直 尺、铅笔等.试剂 1.混合氨基酸溶液(水解后的氨基酸干粉) 甘氨酸溶液：50mg 甘氨酸溶于5mL 水中.蛋氨酸溶液：25mg 蛋氨酸溶于5mL 水中.亮氨酸溶液：25mg 亮氨酸溶于5mL 水中.氨基酸混合液：甘氨酸50mg,亮氨酸25mg,蛋氨酸25mg 共溶于5mL 水中.2.展层溶剂 碱相溶剂：正丁醇∶12%氨水∶95%乙醇 = 13∶13∶13(V/V) 酸相溶剂：正丁醇∶80%甲酸∶水 = 15∶3∶2(V/V),摇匀后放置半天以上,取上清液备用.3.显色贮备液：0.4mol/L 茚三酮—异丙醇∶甲酸∶水=20∶1∶5.4.0.1%硫酸铜：75%乙醇=2∶38,临用前按比例混合.四、实验步骤 (1)标准氨基酸单向上行层析法 1.画基线 戴上指套或橡皮手套,在长约20cm、宽约17cm 滤纸上,距短边2.5cm 处,用铅笔画一条线,即为基线.2.点样 在原线上,从距纸的长边4cm处开始,每隔3cm 用微量注射器或毛细管依次分别点上甘氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和混合氨基酸溶液.点样点干后可重复点加1～2次.每一点的直径不超过2mm,点样量以每种氨基酸含5～20ug 为宜.3.展层 将点好样的滤纸卷成筒形,滤纸两边不相接触,用线固定好,将原线的下端浸入盛有溶剂的培养皿中,不需平衡可立即展层.展层剂为酸性溶剂系统,在展层溶剂中加入显色贮备液(每10mL 展层剂加0.0.5mL 的显色贮备液)进行展层,基线必须保持在液面之上,以免氨基酸与溶剂直接接触.盖好层析缸,当溶剂前沿距纸端2cm 时(大约3h),取出滤纸.4.显色 滤纸取出后,吹干或在80℃左右烘箱内烘3～5min,即出现紫红色的氨基酸层析 斑点.用铅笔划下层析斑点,可进行定性、定量测定.(2)混合氨基酸双向上行纸层析法 1.滤纸准备 将滤纸裁成约28cm2的正方形,在距滤纸相邻两边各2cm 处的交点上,用铅笔划下一点,做为原点.2.点样 取混合氨基酸溶液(5mg/mL)10～15μL,分别点在原点上.3.展层与显色 将点好样的滤纸卷成半筒形,立在培养皿中,原点应在下端.取少量12%的氨水与小烧杯中,盖好层析缸,平衡过夜.次日,取出氨水,加适量碱相溶剂(第一向)与培养皿中,盖好层析缸,上行展层,当溶剂前沿距滤纸上端1～2cm 时,取出滤纸,冷风吹干.将滤纸转90o,再卷成半筒形,竖立在干净培养皿中,并于小烧杯中至少量酸相溶剂,盖好层析缸,平衡过夜,次日将加显色剂的酸性溶剂(每10mL 展层剂加0.0.5mL 的显色贮备液)倾入培养皿中,进行第2向展层.展层毕,取出滤纸,用热风吹干,蓝紫色斑点即显现.五、计算 单向层析的Rf 值,按 “Rf = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离”计量后计算.双向层析Rf 值,由两个数值组成,在第一向计量一次,第二向计量一次,分别与已知的氨基酸在酸碱系统的Rf 值对比,即可初步决定它为何种氨基酸的斑点,将它剪下,在同一张纸剪下一块大小相同的空白纸作为对照,用硫酸铜—乙醇溶液洗脱,用722型分光光度计测定其吸光度,在标准曲线上查出氨基酸的含量.

氨基酸的定性鉴定原理

实验原理：

纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。

纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。

由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。

引申：

氨基酸的定性鉴别：紫外吸收光谱法 

精密称取酪氨酸、色氨酸、苯内氨酸各适量，分别用水制成1ml含20μg（色氨酸）、40μg（酪氨酸）、200μg（苯丙氨酸），在波长230~300nm测定各氨基酸的吸收光谱。 在20种天然氨基酸中，只有酪氨酸、色氨酸和苯内氨酸，在紫外区最大吸收，酪氨酸的最大吸收峰的波长275nm处，色氨酸的最大吸收峰在波长280nm处，同时在波长288nm处有一个肩峰，苯丙氨酸最大的吸收峰在波长258nm处，同时在257nm和264nm处有两个较小的吸收峰。由此可见，这三种氨基酸可以通过紫外吸收光谱加以鉴别。

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